公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

1、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入 5ml 培養(yǎng)

液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀細胞用 1-2ml 培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代，最后放入 37℃，5%CO2細胞

培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

2、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終

止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。使用程序

降溫盒可直接放入-80℃。

二、細胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數(shù)。

b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

三、培養(yǎng)注意事項 

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。

3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。     收到細胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

B16-F10小鼠皮膚黑色素瘤細胞 B16-F10 mouse melanoma cell DMEM培養(yǎng)基+10%FBS 大鼠微管關(guān)聯(lián)蛋白τ(MAPτ)ELISA試劑盒 TGF- Alpha(Human transforming growth factor Alpha)  人轉(zhuǎn)化生長因子α 96T

Phospho-MKP1 (Ser318)： 0酸化原活化蛋白激酶0酸酶1抗體 HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/Vietnam/1194/2004) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照)

CL-0239U-937(人組織細胞淋巴瘤細胞)5×106cells/瓶×2 大鼠微管關(guān)聯(lián)蛋白4(MAP4)ELISA試劑盒 N-AChR  大鼠型乙酰受體 48T96T

Metabotropic glutamate receptor 2： 促代謝型谷酸受體2抗體 tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細胞(B類);F9-CAG-tTA-3E5

PLC/PRF/5(人肝癌亞力山大細胞) 5×106cells/瓶×2 293T/17 [HEK 293T/17] (人胚腎細胞) 大鼠微管蛋白β3(TUBB3)ELISA試劑盒 ODF(Mouse osteoclast differentiation factor)  小鼠破骨細胞分化因子 96T

Involucrin： 囊包蛋白/內(nèi)披蛋白抗體 SCARB2 Others Mouse 小鼠 SCARB2 / LIMP2 / CD36L2 人細胞裂解液 (陽性對照)

小鼠T淋巴細胞;Cl.Ly1+2-/9 人補體片段3c(C3c)ELISA 試劑盒 LH(Luteinizing Hormone) 促黃體生成素抗原 0.5mg

Insulin Receptor R： 胰島素受體相關(guān)受體抗體 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KMY1002

OP9(小鼠骨髓基質(zhì)細胞) 5×106cells/瓶×2 人 CD8B / P37 / LEU2 人細胞裂解液 (陽性對照) 人補體片段3b受體(C3bR)ELISA 試劑盒 LH(Luteinizing Hormone) 人促黃體生成素(多肽) 0.5mg

INCA1： INCA1蛋白抗體 人臍帶間充質(zhì)干細胞HUMSC

PANC10.05人胰腺癌細胞phospho-RUNX1 (Ser249)： 0酸化急性髓細胞白血病1蛋白抗體 豚鼠皮膚細胞;GP-S2

CL-0450SW 982(人滑膜肉瘤細胞)5×106cells/瓶×2 大鼠釋放激素受體抗體(GHR-Ab)ELISA試劑盒 apo-A5(Human apoprotein A5)  人載脂蛋白A5 96T

RIPK3： 受體結(jié)合絲酸蘇酸激酶3抗體 IFNA5 Others Human 人 IFNαG / IFNaG / Ierferon alpha-G 人細胞裂解液 (陽性對照)

人腎近曲小管上皮細胞RNAHRPTEpiC miRNA5 μg 大鼠釋放激素受體(GHR)ELISA試劑盒 DBP(Human Vitamin D-binding protein)  人維生結(jié)合蛋白 96T

Insulin (1G11)： 胰島素單克隆抗體 SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細胞;COS-7