白介素elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)測定方法:
1、定性測定
(1)陽性判定值法(cut-off value,CO值):一般為陰性對照的平均A值加一個常數(shù),試劑制備嚴(yán)格標(biāo)準(zhǔn)化,要先計算出陽性對照A值平均數(shù)和陰性對照A值平均數(shù)。標(biāo)本A值≥CO值即為陽性。
(2)抑制率法:在競爭抑制法中結(jié)果可用抑制率表示。
抑制率(%)=(A陰性對照A- A待測)/陰性對照X100%,一般以抑制率≥50%為陽性
2、半定量測定
結(jié)果一般以滴度表示。將標(biāo)本連續(xù)稀釋后,進(jìn)行ELISA檢測,在陽性臨界值以上的zui高稀釋度即為該標(biāo)本的“滴度"。
3、定量測定
即用己知量的標(biāo)準(zhǔn)品作一系列稀釋后進(jìn)行ELISA測定,與待測標(biāo)本同時進(jìn)行測定,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果以絕對量或活性單位表示。
二、注意事項(xiàng):
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時間最hao控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,最hao做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴(yán)格按照小鼠卵泡抑素樣蛋白3(FSTL3) ELISA試劑盒說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。