公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

1、細(xì)胞傳代：

1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 培養(yǎng)

液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀細(xì)胞用 1-2ml 培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代，最后放入 37℃，5%CO2細(xì)胞

培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

2、細(xì)胞凍存：

1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終

止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；

4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過(guò)夜，24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。使用程序

降溫盒可直接放入-80℃。

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說(shuō)明書為主。將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細(xì)胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

公司正在出售的產(chǎn)品：

CT26.WT小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞 CT26.WT mouse colon cancer cells DMEM培養(yǎng)基+10%FBS 大鼠糖原0酸化酶同工酶II(GP-II)ELISA 試劑盒 pERK(Mouse phospho-extracellular signal-regulated kinase)  小鼠0酸化細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶 96T

MAVS： 線粒體抗病毒信號(hào)MAVS蛋白抗體 IL18BP Others Mouse 小鼠 IL18BP 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

CL-0159MLTC-1(小鼠間質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 大鼠糖原0酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA試劑盒 MCP-3/CCL7(Human monocyte chemotactic protein 3)  人單核細(xì)胞趨化蛋白3 96T

MCSF Receptor： 巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體抗體 tTA基因修飾的小鼠胰腺癌細(xì)胞(B類);Pan02-CAG-tTA-4C5

RKO-AS45-1(人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 6T-CEM(T細(xì)胞白血病) 大鼠糖原0酸化酶同工酶BB(GP-BB)ELISA 試劑盒 CCB(Mouse calcium channel blockers)  小鼠鈣通道阻滯劑 96T

人細(xì)胞;Hela S3 [HeLaS3] 人白細(xì)胞分化抗原40配體(CD40) ELISA試劑盒 CHRNA7(Nicotinic-Acetylcholine receptor alpha 7) 型乙酰受體α7(多肽) 0.5mg

phospho-IRF3 (Ser386)： 0酸化干擾素調(diào)節(jié)因子3抗體 人癌細(xì)胞;MDA-MB-435S

PIEC(豬髖動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 ) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 CD10 / Neprilysin / MME 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 人白細(xì)胞分化抗原40L配體(CD40L) ELISA試劑盒 Nanog fragment 干細(xì)胞關(guān)鍵蛋白(多肽) 0.5mg

ISLR2： ISLR2蛋白抗體 人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞-HPMEC-a

XCL2 Protein Human 重組人 XCL2 蛋白 (His 標(biāo)簽) 人白細(xì)胞分化抗原4(CD4)ELISA 試劑盒 Natrexone/BSA:Natrexone/KLH 納曲酮偶聯(lián)血清白蛋白：納曲酮偶聯(lián)血藍(lán)蛋白 0.5mg

SHP-77人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞Renin： 腎素/血管緊張素形成酶Ren1抗體 大鼠骨肉瘤細(xì)胞;UMR-106

CL-0385MFC-GFP(小鼠前胃癌細(xì)胞(綠色熒光蛋白標(biāo)記))5×106cells/瓶×2 大鼠成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子21(FGF21)ELISA試劑盒 Beta-OHB(Human Beta-Hydroxybutyric Acid)  人β羥 96T

RSPO1： 分泌性蛋白RSPO1抗體 HAPLN1 Others Human 人 HAPLN1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照)

人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞總RNAHRPEpiC NA 大鼠成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2(FGF2/bFGF)ELISA試劑盒 HDL-C(Human High density lipoprotein cholesterol)  人高密度脂蛋白 96T

RASA2： RAS的GTP酶激活蛋白抗體 非洲綠猴腎細(xì)胞(SV40轉(zhuǎn)化);COS-1 [COS1]

三、培養(yǎng)注意事項(xiàng) 

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。

3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。     收到細(xì)胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè) T25 瓶或者 2 個(gè) 6cm 皿。不是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè)10cm 皿。