更新時(shí)間:2024-11-23
Ar 1193 電感受態(tài)細(xì)胞50ul*50菌株一種常用于質(zhì)??寺〉木?。其φ80lacZΔM15基因的產(chǎn)物可與pUC載體編碼的b-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)a互補(bǔ),可用于藍(lán)白斑篩選。recA1和endA1 的突變有利于克隆DNA 的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。
Ar 1193 電感受態(tài)細(xì)胞50ul*50 操作方法(以下操作均按無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行)
1 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中,如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無菌預(yù)冷的離心管中,置于冰浴中。
● 一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl,可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。應(yīng)注意所用DNA 體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。
以下實(shí)驗(yàn)以100 μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
Ar 1193 電感受態(tài)細(xì)胞50ul*502 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA(100 μl 的感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng 超螺旋質(zhì)粒DNA 所飽和),輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物,在冰浴中靜置30 分鐘。
3 將離心管置于42℃水浴中放置60-90 秒,然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中,使細(xì)胞冷卻2-3 分鐘,該過程不要搖動(dòng)離心管。
4 向每個(gè)離心管中加入900 μl 無菌的SOC 或LB 培養(yǎng)基(不含抗生素), 混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)1 小時(shí)(160-220 轉(zhuǎn)/分鐘),目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá),使菌體復(fù)蘇。
Ar 1193 電感受態(tài)細(xì)胞50ul*505 將離心管內(nèi)容物混勻,吸取100 μl 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收,倒置平板,37℃培養(yǎng)12-16 小時(shí)。
● 涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較多,可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板;反之,如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較少,可取200-300 μl 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預(yù)計(jì)的克隆較少,可通過離心(4,000 rpm, 2分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板)
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在 -70℃,不可多次凍融和放置時(shí)間過長(zhǎng),以避免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2. 進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí),應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無菌條件的要求進(jìn)行。
3 為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功,可以保留部分連接反應(yīng)液,以重新轉(zhuǎn)化,將損失降到低。
以下是的相關(guān)產(chǎn)品:
8-OHdG 人8羥基脫氧鳥苷 規(guī)格: 48T/96T
6-keto-PGF1a 人6酮前列腺素F1a 規(guī)格: 48T/96T
6-K-PG 人6酮前列腺素 規(guī)格: 48T/96T
6-OHDA 人6-羥多巴胺 規(guī)格: 48T/96T
5-LO/LOX 人5脂加氧酶 規(guī)格: 48T/96T
5-HT 人5羥色胺 規(guī)格: 48T/96T
5-HIAA 人5羥基吲哚乙酸 規(guī)格: 48T/96T
5-NT 人5核苷酸酶 規(guī)格: 48T/96T
Col Ⅳ 人Ⅳ型膠原 規(guī)格: 48T/96T
PⅢNP 人Ⅲ型前膠原肽 規(guī)格: 48T/96T
PⅢNT 人Ⅲ型前膠原氨基端肽 規(guī)格: 48T/96T
Col Ⅲ 人Ⅲ型膠原 規(guī)格: 48T/96T
HELIX-Ⅱ 人Ⅱ型膠原螺旋肽 規(guī)格: 48T/96T
Col Ⅱ 人Ⅱ型膠原 規(guī)格: 48T/96T
28S rRNP 人28S抗核糖體抗體 規(guī)格: 48T/96T
26S PSM 人26S蛋白酶體 規(guī)格: 48T/96T
OH 人25羥基3 規(guī)格: 48T/96T
2,3-DPG 人2,3-二磷酸甘油酸 規(guī)格: 48T/96T
2,3-dinor-TXB2 人2,3Dinor血栓烷B2 規(guī)格: 48T/96T
PⅠNP 人Ⅰ型原膠原N端前肽 規(guī)格: 48T/96T
PⅠCP 人Ⅰ型前膠原羧基端肽 規(guī)格: 48T/96T
CⅠCP 人Ⅰ型前膠原C末端肽 規(guī)格: 48T/96T
ⅠCTP 人Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽 規(guī)格: 48T/96T
NTX 人Ⅰ型膠原N末端肽 規(guī)格: 48T/96T
CTX-Ⅰ 人Ⅰ型膠原C端肽 規(guī)格: 48T/96T
Col Ⅰ 人Ⅰ型膠原 規(guī)格: 48T/96T
17-KS 人17-酮類固醇 規(guī)格: 48T/96T
17-OHP 人17羥孕酮 規(guī)格: 48T/96T
17-OHCS 人17羥皮質(zhì)類固醇 規(guī)格: 48T/96T
16-α OHE-1 人16α羥基雌酮1 規(guī)格: 48T/96T
15-LO/LOX 人15脂加氧酶 規(guī)格: 48T/96T
12-HETE 人12羥二十烷四烯酸 規(guī)格: 48T/96T
11-DH-TXB2 人11去氫血栓烷B2 規(guī)格: 48T/96T
1,3-βD glucosidase 人1,3-βD葡葡糖苷酶 規(guī)格: 48T/96T
OH 人1,25二羥基3 規(guī)格: 48T/96T
HIS 犬組胺 規(guī)格: 48T/96T
TGF-β1 犬轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子β1 規(guī)格: 48T/96T
MHC/DLA 犬主要組織相容性復(fù)合體 規(guī)格: 48T/96T
PROG 犬孕激素/孕酮 規(guī)格: 48T/96T
HBsAg 犬乙型肝炎表面抗原 規(guī)格: 48T/96T
AChRab 犬乙酰受體抗體 規(guī)格: 48T/96T
ISR-β 犬胰島素受體β 規(guī)格: 48T/96T
INS 犬胰島素 規(guī)格: 48T/96T
Ar 1193 電感受態(tài)細(xì)胞50ul*50 FA 犬 規(guī)格: 48T/96T
TXB2 犬血栓素B2 規(guī)格: 48T/96T
TpP 犬血栓前體蛋白 規(guī)格: 48T/96T
TM 犬血栓調(diào)節(jié)蛋白 規(guī)格: 48T/96T