更新時(shí)間:2024-11-23
Ar 1193 電感受態(tài)細(xì)胞50ul*10是采用大腸桿菌經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞,可用于DNA 的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pUC19 質(zhì)粒檢測,轉(zhuǎn)化效率可達(dá)108個(gè)轉(zhuǎn)化子/μg質(zhì)粒DNA,-70℃保存3個(gè)月轉(zhuǎn)化效率可保持在90%以上。
Ar 1193 電感受態(tài)細(xì)胞50ul*10 操作方法(以下操作均按無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行)
1 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中,如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無菌預(yù)冷的離心管中,置于冰浴中。
● 一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl,可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。應(yīng)注意所用DNA 體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。
以下實(shí)驗(yàn)以100 μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
Ar 1193 電感受態(tài)細(xì)胞50ul*102 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA(100 μl 的感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng 超螺旋質(zhì)粒DNA 所飽和),輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物,在冰浴中靜置30 分鐘。
3 將離心管置于42℃水浴中放置60-90 秒,然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中,使細(xì)胞冷卻2-3 分鐘,該過程不要搖動(dòng)離心管。
4 向每個(gè)離心管中加入900 μl 無菌的SOC 或LB 培養(yǎng)基(不含抗生素), 混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)1 小時(shí)(160-220 轉(zhuǎn)/分鐘),目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá),使菌體復(fù)蘇。
Ar 1193 電感受態(tài)細(xì)胞50ul*105 將離心管內(nèi)容物混勻,吸取100 μl 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收,倒置平板,37℃培養(yǎng)12-16 小時(shí)。
● 涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較多,可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板;反之,如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較少,可取200-300 μl 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預(yù)計(jì)的克隆較少,可通過離心(4,000 rpm, 2分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板)
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在 -70℃,不可多次凍融和放置時(shí)間過長,以避免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2. 進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí),應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無菌條件的要求進(jìn)行。
3 為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功,可以保留部分連接反應(yīng)液,以重新轉(zhuǎn)化,將損失降到低。
以下是的相關(guān)產(chǎn)品:
Thymosin α1 犬α1 規(guī)格: 48T/96T
ICAM-1/CD54 犬細(xì)胞間粘附分子1 規(guī)格: 48T/96T
VK1 犬1 規(guī)格: 48T/96T
VE 犬 規(guī)格: 48T/96T
VA 犬 規(guī)格: 48T/96T
DHT 犬雙氫睪酮 規(guī)格: 48T/96T
RBP 犬結(jié)合蛋白 規(guī)格: 48T/96T
Renin 犬腎素 規(guī)格: 48T/96T
ADM 犬腎上腺髓質(zhì)素 規(guī)格: 48T/96T
T3 犬*狀腺原氨酸 規(guī)格: 48T/96T
PSA 犬前列腺特異性抗原 規(guī)格: 48T/96T
eNOS 犬內(nèi)皮型一氧化氮合成酶 規(guī)格: 48T/96T
ET-1 犬內(nèi)皮素1 規(guī)格: 48T/96T
ET-1 犬內(nèi)皮素1 規(guī)格: 48T/96T
IgE 犬免疫球蛋白E 規(guī)格: 48T/96T
Des 犬結(jié)蛋白 規(guī)格: 48T/96T
T4 犬甲狀腺素 規(guī)格: 48T/96T
MYO/MB 犬肌紅蛋白 規(guī)格: 48T/96T
MYO/MB 犬肌紅蛋白 規(guī)格: 48T/96T
Tn-Ⅰ 犬肌鈣蛋白Ⅰ 規(guī)格: 48T/96T
EPO 犬紅細(xì)胞生成素 規(guī)格: 48T/96T
OPN 犬骨橋素 規(guī)格: 48T/96T
T 犬睪酮 規(guī)格: 48T/96T
HCⅡ 犬肝素輔因子Ⅱ 規(guī)格: 48T/96T
FSH 犬促卵泡素 規(guī)格: 48T/96T
LH 犬促黃體生成激素 規(guī)格: 48T/96T
E 犬雌激素 規(guī)格: 48T/96T
E2 犬雌二醇 規(guī)格: 48T/96T
CD8 犬白細(xì)胞分化抗原8 規(guī)格: 48T/96T
CD6 犬白細(xì)胞分化抗原6 規(guī)格: 48T/96T
IL-6 犬白介素6 規(guī)格: 48T/96T
IL-4 犬白介素4 規(guī)格: 48T/96T
IL-2 犬白介素2 規(guī)格: 48T/96T
IL-18 犬白介素18 規(guī)格: 48T/96T
IFN-γ 犬γ干擾素 規(guī)格: 48T/96T
GABA 犬γ氨基丁酸 規(guī)格: 48T/96T
β-EP 犬β內(nèi)啡肽 規(guī)格: 48T/96T
IFN-α 犬α干擾素 規(guī)格: 48T/96T
5-HT 犬5羥色胺 規(guī)格: 48T/96T
2,3-DPG 犬2,3-二磷酸甘油酸 規(guī)格: 48T/96T
AE 禽腦脊髓炎 規(guī)格: 48T/96T
Ar 1193 電感受態(tài)細(xì)胞50ul*10MHC/BoLA 牛主要組織相容性復(fù)合體 規(guī)格: 48T/96T
PROG 牛孕激素/孕酮 規(guī)格: 48T/96T
ACAC 牛乙酰乙酸檢測 規(guī)格: 48T/96T