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Bst 4.0 Basic Mix (液體預混)

更新時間:2024-12-06

簡要描述:

Bst 4.0 Basic Mix (液體預混)儲存:長期保存制品于-20℃,保存 2 年。

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公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!

商品屬性

貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

P-PR1245

Bst 4.0 Basic Mix (液體預混)

100Tx20μl

該制品為單一組分的 MasterMix(2 倍濃度),包含了反應緩沖液、Mg2+、dNTP、Bst 4.0 DNA/RNA 聚合酶等,使用時只需要加入引物、模板即可進行核酸恒溫擴增。Bst4.0 DNA/RNA 聚合酶具有依賴于 RNA 模板的聚合酶活性(逆轉(zhuǎn)錄),還具有依賴于 DNA 的聚合酶活性,因此無論DNA 或 RNA 樣本均可使用該制品進行高效的恒溫擴增。該制品是進行 LAMP 及 RT-LAMP 擴增反應的試劑。優(yōu)化的反應體系,確??焖俚耐瓿蓹z測試劑的反應體系建立。該系列產(chǎn)品不包含任何其它輔助染料,在 LAMP 的擴增搭配 OG 橙綠變色管進行可視化變色反應。除此外,該制品還可以用于其它恒溫擴增實驗,包括 CPA、SMAP 等。
儲存:長期保存制品于-20℃,保存 2 年。
使用實例(以 LAMP OG 橙綠變色為例)橙綠變色染料(OG Dye)以凍干的形式預加在 8 聯(lián)管蓋上。在 LAMP 反應完畢后(在反應完畢前,務
必不能將管蓋上染料混入反應液中),將 0.2ml EP 管顛倒溶解 OG 染料后。LAMP 的反應產(chǎn)物將與 OG 染料形成強烈的綠色肉眼可見變色反應(陽性),而未發(fā)生擴增的 EP管為深橙色(陰性)。
(1)配制反應體系
在 0.2ml EP 反應管中加入下述試劑
2xBst 4.0 Basic Mix 10 μl
*10xLAMP Primer Mix 2 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到總體積 20 μl
*10xLAMP Primer Mix 濃度:FIP/BIP 分別為 16 μM、LoopF/B 分別為 4 μM、F3/B3 分別為 2 μM全部試劑加入完畢后,輕彈 EP 管底部后,再蓋上 OG 橙綠變色管(蓋上管蓋后務必不能再劇烈混合與倒置,以防止將管蓋上的 OG 染料溶解,OG 染料一旦混入反應液中將會終止 LAMP 反應)。
實驗 LAMP Primer Mix 分別采用 1、1.5、2 μl,以陰性不變色,陽性樣品正常變色為標準,作為后續(xù)測試用量。
(2)反應體系配好后,置于 60~68°C(實驗采用65°C)進行反應 20~45min。(擴增良好的引物組合,通常 25min 即可變色,一般不超過 45min,實驗設置20、25、30、45min)。
(3)觀察結(jié)果:觀察結(jié)果時,盡可能不要與配制反應空間共用,以防止污染操作臺。將反應 EP 管倒置,并手腕輕甩,反應液浸泡 EP 管蓋上的 OG 染料,靜置 30s。再將 EP 反應管正置,并輕甩反應液到 EP 管底部,此時擴增樣品將變?yōu)轷r艷肉眼可見綠色,而陰性未發(fā)生擴增的管將為深橙色。
注意事項
1. 在用于其它恒溫擴增反應時(如 CPA、SMAP 等),可參考如上策略進行使用,反應時間可能會需要調(diào)整。
2. 關(guān)于礦物油的使用,在配制完 LAMP 反應體系后,可加入一滴礦物油覆蓋于反應液上部,以減少氣溶膠的污染。
3. 鑒于特殊的生產(chǎn)工藝, 全系恒溫擴增 Mix 系
列均不能進行濁度分析。

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