更新時間:2024-12-03
同豬嵴病毒梅拉哥病毒PCR檢測試劑盒說明書是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品, 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應緩沖液、PCR 增強劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分,用戶只需加入模板和引物即可進行PCR 反應,具有廣泛的用途。
同豬嵴病毒梅拉哥病毒PCR檢測試劑盒說明書組成及試劑配制:
1、 酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 同豬嵴病毒梅拉哥病毒PCR檢測試劑盒說明書樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
樣本采集、存放及運輸:
同豬嵴病毒梅拉哥病毒PCR檢測試劑盒說明書1、樣本采集:各類型樣本按照常規(guī)方法采集;
2、存放:樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h,-70℃以下可保存,但應避免反復凍融(zui多凍融3次);
3、運輸:采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
特點優(yōu)勢:
1.特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結果。
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
半胱胺酸蛋白酶蛋白-7抗體 英文縮寫: Caspase-7
鈣調(diào)節(jié)素抗體(鈣調(diào)蛋白/鈣調(diào)素) 英文縮寫: Calmodulin
1號染色體開放閱讀框181抗體 英文縮寫: C1orf181
Ⅰ型補體受體抗體(C3b/C4b受體抗體) 英文縮寫: CD35
8型膠原/內(nèi)皮膠原蛋白抗體 英文縮寫: Collagen VIII alpha 1
結合轉化激活因子CITED1抗體 英文縮寫: CITED1
細胞色素P450 2C9抗體 英文縮寫: CYP2C9
細胞色素P450 2D6抗體 英文縮寫: CYP2D6
血小板活化因子CTR9抗體 英文縮寫: CTR9
前列環(huán)素合成酶抗體 英文縮寫: CYP8A1
軟骨寡聚基質蛋白抗體 英文縮寫: COMP
T淋巴細胞CD1A抗體 英文縮寫: CD1A
磷酸化周期素B1抗體 英文縮寫: Phospho-Cyclin B1 (Ser126)
胞漿型磷脂酶A2抗體 英文縮寫: CPLA2 beta
酯轉移蛋白抗體 英文縮寫: CETP
緊密連接蛋白6抗體 英文縮寫: Claudin 6
磷酸化緊密連接蛋白6抗體 英文縮寫: phospho-Claudin 6(Tyr219)
著絲粒蛋白T抗體 英文縮寫: CENPT
染色體相關蛋白2抗體 英文縮寫: CAPD2
著絲粒蛋白P抗體 英文縮寫: CENPP
同豬嵴病毒梅拉哥病毒PCR檢測試劑盒說明書細胞分裂周期相關蛋白5抗體 英文縮寫: CDCA5
染色體相關蛋白2抗體 英文縮寫: CAPG2
細胞周期調(diào)控因子10抗體 英文縮寫: CDC10