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HLE細(xì)胞

更新時(shí)間:2024-11-23

簡要描述:

HLE細(xì)胞公司正在出售的產(chǎn)品:全組織馮庫薩(VON KOSSA)鈣染色試劑盒
石蠟切片茜素紅(ALIZARIN RED S)鈣染色試劑盒
冰凍切片茜素紅(ALIZARIN RED S)鈣染色試劑盒
細(xì)胞茜素紅(ALIZARIN RED S)鈣染色試劑盒
全組織茜素紅(ALIZARIN RED S)鈣染色試劑盒

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公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!

組織硫-γ-合成酶(cystathionine γ-synthase;CGS)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒

遠(yuǎn)西方雜交(FAR WESTERN BLOT 印跡消除

BJ5183-AD-1電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)菌

CASPASE-7蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒

通用型鼠傷沙門菌Salmonella typhimurium基因檢測(cè)試劑盒

HRP反應(yīng)終止緩沖液

細(xì)胞磷酸二酯酶5PDE5)活性酶連續(xù)循環(huán)定磷比色法定量檢測(cè)試劑盒

植物氧化應(yīng)激活性氧(ROS)熒光測(cè)定試劑盒(次氯酸離子)

石蠟切片中性脂質(zhì)尼羅紅直接染色試劑盒

細(xì)菌脯氨酰肽酶(prolinase)比色法定量檢測(cè)試劑盒

冰凍切片組織CDK3蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒

食物抗壞血酸比色法定量檢測(cè)試劑盒

石蠟切片組織脘蛋白(PRION)蛋白表達(dá)熒光

體液肌酸激酶(CK)總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒

真菌/酵母細(xì)胞線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒

著絲粒蛋白I抗體

肝細(xì)胞源性纖維蛋白原相關(guān)蛋白1/FGL1抗體

染色體特異性轉(zhuǎn)錄延伸因子抗體

KIAA1430蛋白抗體

細(xì)胞膜鈣ATP4抗體

β1,3-N-乙酰糖基轉(zhuǎn)移酶抗體

酪蛋白激酶A5受體抗體

HLE細(xì)胞ATP依賴解旋酶DDX1抗體

鋅指轉(zhuǎn)錄因子Slug抗體

1、細(xì)胞傳代:

1)細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí),棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用 PBS 清洗細(xì)胞一次;

2)添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 培養(yǎng)

液終止消化,再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,1000rpm 離心 5min;

3)棄上清,沉淀細(xì)胞用 1-2ml 培養(yǎng)基重懸,然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代,最后放入 37℃,5%CO2細(xì)胞

培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

2、細(xì)胞凍存:

1)細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí),棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用 PBS 清洗細(xì)胞一次;

2)添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終

止消化,輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,1000rpm 離心 5min;

3)用適量的凍存液(FBS:DMSO=9 :1)重懸細(xì)胞,并放置于凍存管中;

4)先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,然后將其移入-80℃過夜,24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長期保存。使用程序

降溫盒可直接放入-80℃。

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考,具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中,加入約8 mL培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,使消化液浸潤所有細(xì)胞,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min(視細(xì)胞情況而定),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中,1000 rpm離心5 min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例;a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液,使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

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公司正在出售的產(chǎn)品:

組織硫-γ-合成酶(cystathionine γ-synthase;CGS)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒

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細(xì)胞磷酸二酯酶5PDE5)活性酶連續(xù)循環(huán)定磷比色法定量檢測(cè)試劑盒

植物氧化應(yīng)激活性氧(ROS)熒光測(cè)定試劑盒(次氯酸離子)

石蠟切片中性脂質(zhì)尼羅紅直接染色試劑盒

細(xì)菌脯氨酰肽酶(prolinase)比色法定量檢測(cè)試劑盒

冰凍切片組織CDK3蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒

食物抗壞血酸比色法定量檢測(cè)試劑盒

石蠟切片組織脘蛋白(PRION)蛋白表達(dá)熒光

體液肌酸激酶(CK)總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒

真菌/酵母細(xì)胞線粒體形態(tài)/活性熒光染色試劑盒

著絲粒蛋白I抗體

肝細(xì)胞源性纖維蛋白原相關(guān)蛋白1/FGL1抗體

染色體特異性轉(zhuǎn)錄延伸因子抗體

KIAA1430蛋白抗體

細(xì)胞膜鈣ATP4抗體

β1,3-N-乙酰糖基轉(zhuǎn)移酶抗體

酪蛋白激酶A5受體抗體

HLE細(xì)胞ATP依賴解旋酶DDX1抗體

鋅指轉(zhuǎn)錄因子Slug抗體

三、培養(yǎng)注意事項(xiàng) 

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等,確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致,若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題,責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。

3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題,部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化,懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞,900 rpm-1000 rpm 離心 3 min,棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞,再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min,用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞,并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?,個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,告知細(xì)胞 的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。     收到細(xì)胞后第一次傳代建議 1:2 傳代 。

9. 注意:  1:2 傳代就是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè) T25 瓶或者 2 個(gè) 6cm 皿。不是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè)10cm 皿。


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