更新時(shí)間:2024-11-23
R5421 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10? 是采用大腸桿菌經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞,可用于DNA 的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pUC19 質(zhì)粒檢測(cè),轉(zhuǎn)化效率可達(dá)108個(gè)轉(zhuǎn)化子/μg質(zhì)粒DNA,-70℃保存3個(gè)月轉(zhuǎn)化效率可保持在90%以上。
R5421 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10? 操作方法(以下操作均按無(wú)菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行)
1 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中,如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無(wú)菌預(yù)冷的離心管中,置于冰浴中。
● 一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl,可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。應(yīng)注意所用DNA 體積不要超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。
以下實(shí)驗(yàn)以100 μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
R5421 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10? 2 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA(100 μl 的感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng 超螺旋質(zhì)粒DNA 所飽和),輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物,在冰浴中靜置30 分鐘。
3 將離心管置于42℃水浴中放置60-90 秒,然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中,使細(xì)胞冷卻2-3 分鐘,該過(guò)程不要搖動(dòng)離心管。
4 向每個(gè)離心管中加入900 μl 無(wú)菌的SOC 或LB 培養(yǎng)基(不含抗生素), 混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)1 小時(shí)(160-220 轉(zhuǎn)/分鐘),目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá),使菌體復(fù)蘇。
R5421 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10? 5 將離心管內(nèi)容物混勻,吸取100 μl 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無(wú)菌的彎頭玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開(kāi)。將平板置于室溫直至液體被吸收,倒置平板,37℃培養(yǎng)12-16 小時(shí)。
● 涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來(lái)調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較多,可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板;反之,如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較少,可取200-300 μl 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預(yù)計(jì)的克隆較少,可通過(guò)離心(4,000 rpm, 2分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過(guò)少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板)
注意事項(xiàng)
1. 感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在 -70℃,不可多次凍融和放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng),以避免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2. 進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí),應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無(wú)菌條件的要求進(jìn)行。
3 為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功,可以保留部分連接反應(yīng)液,以重新轉(zhuǎn)化,將損失降到低。
以下是的相關(guān)產(chǎn)品:
SDH 人脫氫酶 規(guī)格: 48T/96T
CT 人沙眼衣原體抗體 規(guī)格: 48T/96T
CT 人沙眼衣原體抗體 規(guī)格: 48T/96T
KLR 人殺傷細(xì)胞凝集素樣受體 規(guī)格: 48T/96T
KIR 人殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體 規(guī)格: 48T/96T
BPI 人殺菌性/通透性增加蛋白 規(guī)格: 48T/96T
cecropin 人殺菌肽 規(guī)格: 48T/96T
PEDF 人色素上皮衍生因子 規(guī)格: 48T/96T
T3 人*狀腺原氨酸 規(guī)格: 48T/96T
HC gp-39 人軟骨糖蛋白39 規(guī)格: 48T/96T
COMP 人軟骨寡聚基質(zhì)蛋白 規(guī)格: 48T/96T
BRCA-2 人乳腺癌易感蛋白2 規(guī)格: 48T/96T
BRCA-1 人乳腺癌易感蛋白1 規(guī)格: 48T/96T
人乳腺癌標(biāo)志物-CA153ELISA Kit,48T/96T 人乳腺癌標(biāo)志物-CA153ELISA Kit,48T/96T 規(guī)格: 48T/96T
HPV-IgM 人狀瘤病毒抗體IgM 規(guī)格: 48T/96T
HPV-IgG 人狀瘤病毒抗體IgG 規(guī)格: 48T/96T
HPV 人狀瘤病毒抗體 規(guī)格: 48T/96T
LF/LTF Ab-Ig 人乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白抗體IgG 規(guī)格: 48T/96T
LF/LTF 人乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白 規(guī)格: 48T/96T
LDH 人乳酸脫氫酶 規(guī)格: 48T/96T
Hc 人溶血補(bǔ)體 規(guī)格: 48T/96T
HLAMP-2 人溶酶體相關(guān)膜蛋白2 規(guī)格: 48T/96T
LZM 人 規(guī)格: 48T/96T
β-HCG β 規(guī)格: 48T/96T
HCG 規(guī)格: 48T/96T
PAPP-A 人相關(guān)血漿蛋白A 規(guī)格: 48T/96T
SP1/PSβ1-G 人特異性β1糖蛋白 規(guī)格: 48T/96T
HG 人皰疹抗體 規(guī)格: 48T/96T
HSF-1 人熱休克因子1 規(guī)格: 48T/96T
HSP gp96 人熱休克蛋白糖蛋白96 規(guī)格: 48T/96T
HSP-90 人熱休克蛋白90 規(guī)格: 48T/96T
HSP-70 人熱休克蛋白70 規(guī)格: 48T/96T
Hsp-60 人熱休克蛋白60 規(guī)格: 48T/96T
R5421 感受態(tài)細(xì)胞100ul*10? HSP-40 人熱休克蛋白40 規(guī)格: 48T/96T
HSP-27 人熱休克蛋白27 規(guī)格: 48T/96T
HSP-20 人熱休克蛋白20 規(guī)格: 48T/96T