更新時(shí)間:2024-11-23
EGY48 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50菌株一種常用于質(zhì)??寺〉木?。其φ80lacZΔM15基因的產(chǎn)物可與pUC載體編碼的b-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)a互補(bǔ),可用于藍(lán)白斑篩選。recA1和endA1 的突變有利于克隆DNA 的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。
EGY48 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50以下是的訂購(gòu)信息儲(chǔ)存條件:-70℃凍存
操作方法:
1. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)于室溫或手心片刻待其部分融化,處于冰水混合狀態(tài)時(shí)插入冰中。
2.每100 μl感受態(tài)加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA(轉(zhuǎn)化效率較高,*次使用前做預(yù)實(shí)驗(yàn)確定所加質(zhì)粒的量),用手管底混勻,依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。
3. 加入700 μl無抗生素的LB或YEB液體培養(yǎng)基,于28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時(shí)。
EGY48 感受態(tài)細(xì)胞100ul*504. 6000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天
注意事項(xiàng)
1. 加入質(zhì)粒時(shí)體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10;質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機(jī)物污染,轉(zhuǎn)化效率急劇下降;質(zhì)粒增大一倍,轉(zhuǎn)化效率下降一個(gè)數(shù)量級(jí)。
2. 混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量。
EGY48 感受態(tài)細(xì)胞100ul*503. 平板上陽(yáng)性克隆密度過大時(shí),由于營(yíng)養(yǎng)不足,陽(yáng)性克隆生長(zhǎng)變慢,菌落變小,為了獲得大的菌落,應(yīng)減少質(zhì)粒用量。
4. 濃度不應(yīng)高于25 μg/ml,過高的濃度不利于農(nóng)桿菌生長(zhǎng),會(huì)降低其生長(zhǎng)速度和轉(zhuǎn)化效率。本公司感受態(tài)計(jì)算轉(zhuǎn)化效率時(shí)所用平板只含有50 μg/ml kan,若所用平板含有20 μg/ml rif則轉(zhuǎn)化效率降低到1/2。
5. 培養(yǎng)基中加入的目的是防止雜菌生長(zhǎng)、篩選農(nóng)桿菌;根據(jù)所用菌株抗性加入Ti質(zhì)粒篩選抗生素可防止Ti質(zhì)粒丟失,但Ti質(zhì)粒篩選抗生素不利于農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)基因操作,所以一般培養(yǎng)農(nóng)桿菌時(shí)不考慮這些抗生素,Ti質(zhì)粒丟失的概率極低(可以忽略)。
aPT1/aPT2 人抗凝血素抗體 規(guī)格: 48T/96T
ATR 人抗受體 規(guī)格: 48T/96T
AT-Ⅲ 人抗Ⅲ抗體 規(guī)格: 48T/96T
ASCA 人抗釀酒酵母抗體 規(guī)格: 48T/96T
ASCA 人抗釀酒酵母抗體 規(guī)格: 48T/96T
ABAb 人抗腦組織抗體 規(guī)格: 48T/96T
ABAb 人抗腦組織抗體 規(guī)格: 48T/96T
IFA 人抗內(nèi)因子抗體 規(guī)格: 48T/96T
AECA 人抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體 規(guī)格: 48T/96T
AGA 人抗麥膠蛋白/麥醇溶蛋白抗體 規(guī)格: 48T/96T
AGA 人抗麥膠蛋白/麥醇溶蛋白抗體 規(guī)格: 48T/96T
AOAb 人抗卵巢抗體 規(guī)格: 48T/96T
EHF 人抗流行性出血熱病毒抗體IgM 規(guī)格: 48T/96T
EHF 人抗流行性出血熱病毒抗體IgM 規(guī)格: 48T/96T
EHF 人抗流行性出血熱病毒抗體IgG 規(guī)格: 48T/96T
APSA 人抗磷脂??贵w 規(guī)格: 48T/96T
APSA 人抗磷脂酰抗體 規(guī)格: 48T/96T
Apl/APA 人抗磷脂抗體 規(guī)格: 48T/96T
TA 人抗磷壁酸抗體 規(guī)格: 48T/96T
TA 人抗磷壁酸抗體 規(guī)格: 48T/96T
ALG 人抗淋巴細(xì)胞球蛋白 規(guī)格: 48T/96T
ALA 人抗淋巴細(xì)胞抗體 規(guī)格: 48T/96T
ASO 人抗鏈球菌溶血素O/抗O 規(guī)格: 48T/96T
ADH/VP/AVP 人抗利尿激素/加壓素 規(guī)格: 48T/96T
SCA 人抗類固醇細(xì)胞抗體 規(guī)格: 48T/96T
RANA 人抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎核抗原抗體 規(guī)格: 48T/96T
RANA 人抗類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎核抗原抗體 規(guī)格: 48T/96T
anti-RV 人抗狂犬病毒抗體 規(guī)格: 48T/96T
anti-RV 人抗狂犬病毒抗體 規(guī)格: 48T/96T
ENA-Ab 人抗可提取核抗原抗體 規(guī)格: 48T/96T
SLA 人抗可溶性肝抗原抗體 規(guī)格: 48T/96T
Attacin 人抗菌肽 規(guī)格: 48T/96T
anti-CMV IgM 人抗巨細(xì)胞病毒抗體IgM 規(guī)格: 48T/96T
anti-CMV IgM 人抗巨細(xì)胞病毒抗體IgM 規(guī)格: 48T/96T
anti-CMV IgG 人抗巨細(xì)胞病毒抗體IgG 規(guī)格: 48T/96T
anti-macrophage Ab 人抗巨噬細(xì)胞抗體 規(guī)格: 48T/96T
TRACP-5b 人抗酒石酸酸性磷酸酶5b 規(guī)格: 48T/96T
AsAb 人抗抗體 規(guī)格: 48T/96T
AFA 人抗角蛋白絲聚集素/絲集蛋白抗體 規(guī)格: 48T/96T
AKA 人抗角蛋白抗體 規(guī)格: 48T/96T
EGY48 感受態(tài)細(xì)胞100ul*50CLA 人抗膠原蛋白抗體 規(guī)格: 48T/96T
ATMA/TMAB 人抗甲狀腺微粒體抗體 規(guī)格: 48T/96T
ATGA/TGAB 人抗甲狀腺球蛋白抗體 規(guī)格: 48T/96T
TPO-Ab 人抗甲狀腺過氧化物酶抗體 規(guī)格: 48T/96T