更新時間:2024-11-23
ATCC15834 感受態(tài)細胞100ul*100菌株一種常用于質(zhì)粒克隆的菌株。其φ80lacZΔM15基因的產(chǎn)物可與pUC載體編碼的b-半乳糖苷酶氨基端實現(xiàn)a互補,可用于藍白斑篩選。recA1和endA1 的突變有利于克隆DNA 的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。
ATCC15834 感受態(tài)細胞100ul*100以下是的訂購信息儲存條件:-70℃凍存
操作方法:
1. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)于室溫或手心片刻待其部分融化,處于冰水混合狀態(tài)時插入冰中。
2.每100 μl感受態(tài)加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA(轉(zhuǎn)化效率較高,*次使用前做預(yù)實驗確定所加質(zhì)粒的量),用手管底混勻,依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。
ATCC15834 感受態(tài)細胞100ul*1003. 加入700 μl無抗生素的LB或YEB液體培養(yǎng)基,于28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時。
4. 6000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天
注意事項
1. 加入質(zhì)粒時體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10;質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機物污染,轉(zhuǎn)化效率急劇下降;質(zhì)粒增大一倍,轉(zhuǎn)化效率下降一個數(shù)量級。
ATCC15834 感受態(tài)細胞100ul*1002. 混入質(zhì)粒時應(yīng)輕柔操作。轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量。
3. 平板上陽性克隆密度過大時,由于營養(yǎng)不足,陽性克隆生長變慢,菌落變小,為了獲得大的菌落,應(yīng)減少質(zhì)粒用量。
4. *濃度不應(yīng)高于25 μg/ml,過高的*濃度不利于農(nóng)桿菌生長,會降低其生長速度和轉(zhuǎn)化效率。本公司感受態(tài)計算轉(zhuǎn)化效率時所用平板只含有50 μg/ml kan,若所用平板含有20 μg/ml rif則轉(zhuǎn)化效率降低到1/2。
5. 培養(yǎng)基中加入*的目的是防止雜菌生長、篩選農(nóng)桿菌;根據(jù)所用菌株抗性加入Ti質(zhì)粒篩選抗生素可防止Ti質(zhì)粒丟失,但Ti質(zhì)粒篩選抗生素不利于農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)基因操作,所以一般培養(yǎng)農(nóng)桿菌時不考慮這些抗生素,Ti質(zhì)粒丟失的概率極低(可以忽略)。
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MCP-4/CCL13 人單核細胞趨化蛋白4 規(guī)格: 48T/96T
MCP-3/CCL7 人單核細胞趨化蛋白3 規(guī)格: 48T/96T
MCP-2/CCL8 人單核細胞趨化蛋白2 規(guī)格: 48T/96T
HSV-Ag2 人單純皰疹病毒抗原2 規(guī)格: 48T/96T
HSV-Ag1 人單純皰疹病毒抗原-1 規(guī)格: 48T/96T
HSV-Ag1 人單純皰疹病毒抗原-1 規(guī)格: 48T/96T
HSVⅡ-Ab 人單純皰疹病毒Ⅱ型抗體 規(guī)格: 48T/96T
MAO 人單胺氧化酶 規(guī)格: 48T/96T
Big ET 人大內(nèi)皮素 規(guī)格: 48T/96T
Big ET 人大內(nèi)皮素 規(guī)格: 48T/96T
colicin 人大腸菌素 規(guī)格: 48T/96T
CCSA-4 人大腸癌專一抗原4 規(guī)格: 48T/96T
CCSA-3 人大腸癌專一抗原3 規(guī)格: 48T/96T
CCSA-2 人大腸癌專一抗原2 規(guī)格: 48T/96T
PRL 人催乳素 規(guī)格: 48T/96T
MF/MPF 人促有絲分裂因子 規(guī)格: 48T/96T
GnRH 人*釋放激素 規(guī)格: 48T/96T
DSIP 人促睡眠肽 規(guī)格: 48T/96T
GHRH 人促生長激素釋放激素 規(guī)格: 48T/96T
ACTH 人促腎上腺皮質(zhì)激素 規(guī)格: 48T/96T
CRH 人促腎上皮質(zhì)激素釋放激素 規(guī)格: 48T/96T
FSH 人促卵泡素 規(guī)格: 48T/96T
TRH 人促甲狀腺素釋放激素 規(guī)格: 48T/96T
TSH 人促甲狀腺素 規(guī)格: 48T/96T
TSHR 人促甲狀腺激素受體抗體 規(guī)格: 48T/96T
LH * 規(guī)格: 48T/96T
人促分裂素原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶3 人促分裂素原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶3 規(guī)格: 48T/96T
E3 人雌三醇 規(guī)格: 48T/96T
E 人雌激素 規(guī)格: 48T/96T
ER 人雌二醇受體 規(guī)格: 48T/96T
E2 人雌二醇 規(guī)格: 48T/96T
PACAP 人垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽 規(guī)格: 48T/96T
VMA 人垂草扁桃酸 規(guī)格: 48T/96T
PF/PFP 人穿孔素/成孔蛋白 規(guī)格: 48T/96T
PF/PFP 人穿孔素/成孔蛋白 規(guī)格: 48T/96T
VLA 人遲現(xiàn)抗原 規(guī)格: 48T/96T
ATCC15834 感受態(tài)細胞100ul*100 VLA 人遲現(xiàn)抗原 規(guī)格: 48T/96T
MPF 人成熟促進因子 規(guī)格: 48T/96T
OGP 人成骨生長肽 規(guī)格: 48T/96T
SOD 人超氧化物歧化酶 規(guī)格: 48T/96T
hs-CRP 人超敏C反應(yīng)蛋白 規(guī)格: 48T/96T
4 向每個離心管中加入900 μl 無菌的SOC 或LB 培養(yǎng)基(不含抗生素), 混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)1 小時(160-220 轉(zhuǎn)/分鐘),目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達,使菌體復(fù)蘇。
C58C1 電感受態(tài)細胞50ul*105 將離心管內(nèi)容物混勻,吸取100 μl 已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細胞加到含相應(yīng)抗生素的SOB 或LB 固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無菌的彎頭玻棒輕輕的將細胞均勻涂開。將平板置于室溫直至液體被吸收,倒置平板,37℃培養(yǎng)12-16 小時。
● 涂布用量可根據(jù)具體實驗來調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較多,可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板;反之,如轉(zhuǎn)化的DNA 總量較少,可取200-300 μl 轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預(yù)計的克隆較少,可通過離心(4,000 rpm, 2分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板)
注意事項
1. 感受態(tài)細胞應(yīng)保存在 -70℃,不可多次凍融和放置時間過長,以避免降低感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化效率。
2. 進行轉(zhuǎn)化操作時,應(yīng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無菌條件的要求進行。
3 為防止轉(zhuǎn)化實驗不成功,可以保留部分連接反應(yīng)液,以重新轉(zhuǎn)化,將損失降到低。
以下是的相關(guān)產(chǎn)品:
ELISA Kit,48T/96T 規(guī)格: 48T/96T
β-Lg 人β乳球蛋白 規(guī)格: 48T/96T
β-OHB 人β羥丁酸 規(guī)格: 48T/96T
βGD 人β葡萄糖醛酸苷酶 規(guī)格: 48T/96T
β-glucosidase 人β葡糖苷酶 規(guī)格: 48T/96T
β-naphthol 人β萘酚 規(guī)格: 48T/96T
BLI 人β內(nèi)酰胺酶抑制劑 規(guī)格: 48T/96T
β-lactamase 人β內(nèi)酰胺酶 規(guī)格: 48T/96T
β-EPR 人β內(nèi)啡肽受體 規(guī)格: 48T/96T
β-EP 人β內(nèi)啡肽 規(guī)格: 48T/96T
β-Cat 人β連環(huán)蛋白/聯(lián)蛋白 規(guī)格: 48T/96T
β Manase 人β甘露糖苷酶 規(guī)格: 48T/96T
IFN-β/IFNB 人β干擾素 規(guī)格: 48T/96T
Aβ1-42 人β淀粉樣蛋白1-42 規(guī)格: 48T/96T
Aβ1-40 人β淀粉樣蛋白1-40 規(guī)格: 48T/96T
β-LPH 人β-促脂素 規(guī)格: 48T/96T
βGAL 人β半乳糖苷酶 規(guī)格: 48T/96T
β-hexosaminidase A 人β氨基己糖苷酶A 規(guī)格: 48T/96T
integrin β2/CD11+CD18 人β2整合素 規(guī)格: 48T/96T
BMG/β2-MG 人β2微球蛋白 規(guī)格: 48T/96T
β2-GP1 Ab IgM 人β2糖蛋白1抗體IgM 規(guī)格: 48T/96T
β2-GP1 Ab IgG 人β2糖蛋白1抗體IgG 規(guī)格: 48T/96T
β2-GP1 IgA/G/M 人β2糖蛋白1抗體IgA/G/M 規(guī)格: 48T/96T
β2-GP1 Ab IgA 人β2糖蛋白1抗體IgA 規(guī)格: 48T/96T
β2-GP 人β2糖蛋白 規(guī)格: 48T/96T
α-enolase 人α烯醇化酶 規(guī)格: 48T/96T
α-SYN 人α突觸核蛋白 規(guī)格: 48T/96T
α-La 人α乳清蛋白 規(guī)格: 48T/96T
αHBDH 人α羥基丁酸脫氫酶 規(guī)格: 48T/96T
α-glucosidase 人α葡萄糖苷酶 規(guī)格: 48T/96T
α-SMA 人α平滑肌肌動蛋白 規(guī)格: 48T/96T
α-EP 人α-內(nèi)*肽 規(guī)格: 48T/96T
α Actin 人α肌動蛋白 規(guī)格: 48T/96T
α-SCA 人α橫紋肌肌動蛋白 規(guī)格: 48T/96T
α-GST 人α*S轉(zhuǎn)移酶 規(guī)格: 48T/96T
α Manase 人α甘露糖苷酶 規(guī)格: 48T/96T
C58C1 電感受態(tài)細胞50ul*10
ACTN-3 人α-輔肌動蛋白3 規(guī)格: 48T/96T
Gal 人α半乳糖基抗體 規(guī)格: 48T/96T