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EPI300 感受態(tài)細胞100ul*10

更新時間:2024-11-22

簡要描述:

EPI300 感受態(tài)細胞100ul*10是采用大腸桿菌經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞,可用于DNA 的化學轉化。使用pUC19 質粒檢測,轉化效率可達108個轉化子/μg質粒DNA,-70℃保存3個月轉化效率可保持在90%以上。

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EPI300 感受態(tài)細胞100ul*10以下是的訂購信息儲存條件:-70℃凍存
操作方法:
1. 取-80℃保存的農桿菌感受態(tài)于室溫或手心片刻待其部分融化,處于冰水混合狀態(tài)時插入冰中。
2.每100 μl感受態(tài)加入0.01-1 μg質粒DNA(轉化效率較高,*次使用前做預實驗確定所加質粒的量),用手管底混勻,依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。
EPI300 感受態(tài)細胞100ul*103. 加入700 μl無抗生素的LB或YEB液體培養(yǎng)基,于28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時。
4. 6000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天
注意事項
1. 加入質粒時體積不應大于感受態(tài)體積的1/10;質粒不純或存在乙醇等有機物污染,轉化效率急劇下降;質粒增大一倍,轉化效率下降一個數(shù)量級。
2. 混入質粒時應輕柔操作。轉化高濃度的質粒可相應減少終用于涂板的菌量。
3. 平板上陽性克隆密度過大時,由于營養(yǎng)不足,陽性克隆生長變慢,菌落變小,為了獲得大的菌落,應減少質粒用量。
4. 濃度不應高于25 μg/ml,過高的濃度不利于農桿菌生長,會降低其生長速度和轉化效率。本公司感受態(tài)計算轉化效率時所用平板只含有50 μg/ml kan,若所用平板含有20 μg/ml rif則轉化效率降低到1/2。
EPI300 感受態(tài)細胞100ul*105. 培養(yǎng)基中加入的目的是防止雜菌生長、篩選農桿菌;根據(jù)所用菌株抗性加入Ti質粒篩選抗生素可防止Ti質粒丟失,但Ti質粒篩選抗生素不利于農桿菌的轉基因操作,所以一般培養(yǎng)農桿菌時不考慮這些抗生素,Ti質粒丟失的概率極低(可以忽略)。

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