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DH5α 感受態(tài)細(xì)胞100ul*100

更新時(shí)間:2024-11-22

簡(jiǎn)要描述:

DH5α 感受態(tài)細(xì)胞100ul*100菌株一種常用于質(zhì)??寺〉木?。其φ80lacZΔM15基因的產(chǎn)物可與pUC載體編碼的b-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)a互補(bǔ),可用于藍(lán)白斑篩選。recA1和endA1 的突變有利于克隆DNA 的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。

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操作方法:
1. 取-80℃保存的農(nóng)桿菌感受態(tài)于室溫或手心片刻待其部分融化,處于冰水混合狀態(tài)時(shí)插入冰中。
2.每100 μl感受態(tài)加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA(轉(zhuǎn)化效率較高,*次使用前做預(yù)實(shí)驗(yàn)確定所加質(zhì)粒的量),用手管底混勻,依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。
3. 加入700 μl無(wú)抗生素的LB或YEB液體培養(yǎng)基,于28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時(shí)。
4. 6000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應(yīng)抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天
DH5α 感受態(tài)細(xì)胞100ul*100注意事項(xiàng)
1. 加入質(zhì)粒時(shí)體積不應(yīng)大于感受態(tài)體積的1/10;質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機(jī)物污染,轉(zhuǎn)化效率急劇下降;質(zhì)粒增大一倍,轉(zhuǎn)化效率下降一個(gè)數(shù)量級(jí)。
2. 混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)??上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量。
3. 平板上陽(yáng)性克隆密度過(guò)大時(shí),由于營(yíng)養(yǎng)不足,陽(yáng)性克隆生長(zhǎng)變慢,菌落變小,為了獲得大的菌落,應(yīng)減少質(zhì)粒用量。
4. 濃度不應(yīng)高于25 μg/ml,過(guò)高的濃度不利于農(nóng)桿菌生長(zhǎng),會(huì)降低其生長(zhǎng)速度和轉(zhuǎn)化效率。本公司感受態(tài)計(jì)算轉(zhuǎn)化效率時(shí)所用平板只含有50 μg/ml kan,若所用平板含有20 μg/ml rif則轉(zhuǎn)化效率降低到1/2。
5. 培養(yǎng)基中加入的目的是防止雜菌生長(zhǎng)、篩選農(nóng)桿菌;根據(jù)所用菌株抗性加入Ti質(zhì)粒篩選抗生素可防止Ti質(zhì)粒丟失,但Ti質(zhì)粒篩選抗生素不利于農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)基因操作,所以一般培養(yǎng)農(nóng)桿菌時(shí)不考慮這些抗生素,Ti質(zhì)粒丟失的概率極低(可以忽略)。

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磷酸化毛細(xì)血管擴(kuò)張性共濟(jì)失調(diào)癥突變蛋白抗體 NRAMP-1 ELISA Kit 自然抗性相關(guān)巨噬細(xì)胞蛋白1(NRAMP-1)ELISA試劑盒
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ACTR2 激活素受體2A抗體
Activin Receptor Type IIB 激活素受體2B抗體
C2orf88  2號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框88抗體
ARHGEF18 G蛋白偶聯(lián)受體ARHGEF18抗體
Activin A Receptor Type IB 激活素受體1B抗體
ARA24 雄激素受體相關(guān)蛋白24抗體
Amyloid Precursor Protein 淀粉樣肽前體蛋白抗體
ADCY2 腺苷酸環(huán)化酶2抗體
APOC3 載脂蛋白C3抗體
Apolipoprotein E4 載脂蛋白E4抗體
AMBRA1 自噬相關(guān)基因AMBRA1抗體
Phospho-ATG4C 磷酸化自噬相關(guān)蛋白4C抗體
Phospho-ATG4C 磷酸化自噬相關(guān)蛋白4C抗體
phospho-ASK1  磷酸化細(xì)胞凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1抗體
phospho-ATXN1  磷酸化失調(diào)癥蛋白1抗體
DH5α 感受態(tài)細(xì)胞100ul*100phospho-Amyloid Precursor Protein  磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體
phospho-ASK1  磷酸化細(xì)胞凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1抗體
phospho-ASK1  磷酸化細(xì)胞凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1抗體
phospho-ATF2  磷酸化活化復(fù)制因子2抗體
Phospho-ATP1A1  磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體
Phospho-ATP1A1  磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體

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