在做ELISA實(shí)驗(yàn)的時(shí)候,所采集的標(biāo)本大多都需要溶解稀釋后才能用來(lái)做實(shí)驗(yàn)。有的ELISA試劑盒里說(shuō)明書(shū)上有寫(xiě)標(biāo)本的溶解及稀釋比例,這樣您就可以直接通過(guò)比例進(jìn)行稀釋?zhuān)怯械恼f(shuō)明書(shū)上并沒(méi)有寫(xiě)稀釋比例,那樣您就只有自己去摸索找尋較為合適的溶解及稀釋比例! 一、ELISA試劑盒溶解
(1)粉末規(guī)范品時(shí)間短離心,讓因運(yùn)送沾到管蓋、管壁的規(guī)范品沉到管底。
?。?)依據(jù)瓶標(biāo)簽參加必定體積的蒸餾水,加水后輕柔渦旋震動(dòng),室溫靜置溶解10-30分鐘,讓粉末*溶解。
留意:加水后暫不必移液槍吹吸,防止蛋白未溶解,槍頭帶出部分蛋白,待*溶解后可吹吸或渦旋振動(dòng)混勻。
二、ELISA試劑盒規(guī)范品梯度稀釋:
?。?)耗材預(yù)備:預(yù)備8個(gè)1.5Ml離心管,寫(xiě)上S1-S7、空白。
?。?)規(guī)范品稀釋液的挑選:若血清、血漿、安排勻漿樣本,用試劑盒中的規(guī)范品稀釋液,梯度稀釋規(guī)范品。若細(xì)胞上清樣本,主張用細(xì)胞培養(yǎng)基梯度稀釋規(guī)范品。
?。?)梯度稀釋?zhuān)阂罁?jù)說(shuō)明書(shū),每管參加等體積的規(guī)范品稀釋液(培養(yǎng)基)。汲取同體積溶解好的規(guī)范品到S1管中,吹打10次混勻,渦旋5S。從S1管中汲取同體積溶液到S2管,吹打10次混勻,渦旋5s。同法稀釋S3-S7濃度。
(4)空白: ELISA試劑盒規(guī)范品稀釋液(培養(yǎng)基)作為空白即零濃度。
留意:梯度稀釋規(guī)范品時(shí),渦旋震動(dòng)混勻后可時(shí)間短離心,讓到蓋子、壁上的液體到管底,再開(kāi)始稀釋下個(gè)濃度。規(guī)范品溶解、梯度稀釋是ELISA試驗(yàn)要害點(diǎn),按以上辦法梯度稀釋就可!